激光共聚焦顯微鏡以激光作為光源。樣品被放置在載物臺上,由激光器發出的激光束通過物鏡準確地聚焦在樣品表面的特定點。如果樣品中有熒光物質,該點的熒光物質會受到激光的激發而產生熒光信號。
針孔過濾:在探測器前設置了一個針孔裝置,這是其關鍵技術之一。只有來自焦平面上的熒光信號能夠通過這個針孔到達探測器,而焦平面以外的散射光、雜散光等模糊背景光則會被針孔阻擋掉。這種設計有效地排除了非焦平面光線的干擾,大大提高了成像的清晰度和對比度。
掃描成像:通過對樣品進行逐點掃描的方式,收集不同位置的熒光信息。隨著掃描過程的進行,可以獲取一系列二維光學橫斷面圖像。計算機系統對這些圖像進行處理和整合,能夠重構出樣品的三維結構模型,實現對樣品內部的觀察和分析。
激光共聚焦顯微鏡的使用注意事項:
1.操作規范方面
-嚴格遵循規程:必須嚴格按照設備的使用規則操作,不得隨意更改操作程序。
-保護激光管:激光發射管使用壽命有限且價格昂貴,在開關機順序以及掃描過程中都要注意對其加以保護。
2.安全防護方面
-防止激光傷害:小心不要接觸中等功率和高功率的激光輻射。切勿將布或紙等易燃材料放在光路中,也不要在共焦顯微鏡附近存放或使用易燃、易爆物質。
-環境要求:設備應放置在穩固、干燥、通風良好的環境中,遠離有潮濕氣氛或者有化學氣味的區域。
3.樣品處理方面
-固定樣品:對于生物樣品,常用甲醛、戊二醛等固定劑進行固定,以防止樣品在后續處理過程中發生降解或變形。
-控制環境穩定性:若進行活細胞成像,需要穩定的溫控環境。應提前打開溫控設備,確保溫度、二氧化碳濃度和濕度等條件符合細胞生長要求;同時,長時間成像過程中要避免外界干擾,如震動、氣流等。
4.日常維護方面
-清潔保養:使用完畢后,要及時清洗載物臺,并用干凈柔軟的毛巾擦拭顯微鏡外部,防止灰塵堆積。定期檢查設備各部件是否正常,如有異常應及時聯系專業人員維修。